Е.В. Кузьминова¹, доктор ветеринарных наук, главный научный сотрудник отдела фармакологии;
Д.В. Белоглазов², кандидат биологических наук, ветеринарный врач;
С.В. Мукасеев², кандидат ветеринарных наук, ветеринарный врач;
С.А. Пархоменко², ветеринарный врач;
Зейналов О.А.², кандидат биологических наук, главный специалист по науке.

¹ Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии» (350055, г. Краснодар, пгт. Знаменский, ул. Первомайская 4).
² ООО «НПК «СКиФФ» (117246, г. Москва, Научный проезд, д. 20, стр. 3, эт. 2, пом. 204).

Ключевые слова: сукцинат тразодона, габапентин, Тразапентин^® таблетки, острая токсичность, хроническая токсичность, аллергизирующие свойства.

Сокращения: АлАТ — аланинаминотрансфераза, АсАТ — аспартатаминотрансфераза, ГАМК — гамма-аминомасляная кислота, ДВ — действующее вещество, ЖКТ — желудочно-кишечный тракт, ЛДГ — лактатдегидрогеназа, ЛП — лекарственный препарат, МТ — масса тела, НПВП — нестероидный противовоспалительный препарат, СОЭ — скорость оседания эритроцитов, ЦНС — центральная нервная система, ЦОГ-2 — циклооксигеназа-2, ЩФ — щелочная фосфатаза, LD⁵⁰ — lethal dose (полулетальная доза).

Длительная и масштабная селекция привела к появлению множества пород собак, которые из-за предрасположенности к хроническим заболеваниям и генетических особенностей не могли бы выжить без помощи человека. Современные достижения в ветеринарной медицине и разработка новых рационов значительно увеличили продолжительность жизни мелких домашних животных. Однако это привело к увеличению числа пожилых собак, что свою очередь, вызвало рост длительно протекающих заболеваний, сопровождающиеся хронической болью [20, 30, 45], которые существенно ухудшают качество жизни собак, делая необходимым более внимательное отношение к их здоровью и уходу.

Хроническая боль обычно определяется как таковая, если она продолжается более 3 мес [54]. Ее триггерами у собак могут быть остеоартрит, повреждения нервной ткани, заболевания ЖКТ, органов зрения и слуха, неопластические процессы и др. [30]. Любое хроническое болевое состояние может впоследствии развить нейропатический компонент [33, 46, 57] из-за постоянного ноцицептивного воздействия и последующих изменений в ЦНС, вызванных дисфункцией соматосенсорной системы [38]. Также важно учитывать, что клинические проявления хронической боли могут быть незначительными, поэтому изменения в повседневном поведении животного, приводящие к общему снижению его подвижности, служат хорошими ее индикаторами.

Хроническая боль оказывает существенное влияние на благополучие собак, затрагивая как их физическое здоровье, так и эмоциональное состояние. Постоянный болевой синдром приводит к ограничению подвижности и снижению активности, что нарушает привычный образ и существенно снижает качество жизни. Животные, страдающие от хронической боли, становятся менее заинтересованными в прогулках, играх и других формах физической активности, которые являются важной частью их повседневного поведения [11, 41].

Постоянный дискомфорт вызывает у животных стресс, беспокойство и раздражительность. Многие собаки становятся менее общительными, избегают контакта с людьми и другими животными, проявляют агрессию или, наоборот, становятся апатичными [42]. Хроническая боль может приводить к изменениям поведения, снижению аппетита или отказу от корма, нарушению режима сна и бодрствования, что не только ухудшает их эмоциональное состояние, но и создает дополнительные трудности для владельцев, которые часто не понимают причин таких изменений и связывают их со старением питомца.

Дистресс, вызванный непрекращающимся болевым синдромом, приводит к активации гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, что может негативно сказаться на иммунном статусе, делая животных более восприимчивыми к инфекциям и замедляя процессы регенерации тканей.

Социальная изоляция служит еще одним последствием хронической боли у собак, при которой они часто избегают интеракций как с другими животными, так и с членами семьи. Это может нарушить социальные связи, которые играют важную роль в поддержании их эмоционального и психологического благополучия [58].

Таким образом, боль оказывает глобальное влияние на благополучие собак, затрагивая их физический, эмоциональный и социальный статус. Эффективный контроль разных видов хронической боли и ее причин — это ключевой фактор в долгосрочном поддержании высокого качества жизни животных и сохранении их здоровья.

Актуальные рекомендации [30] предусматривают комбинированную терапию (мультимодальный подход) к контролю хронической боли у собак, которая включает в себя НПВП, моноклональные антитела к фактору роста нервов, кормовые добавки с высоким содержанием жирных кислот омега-3, физические упражнения, оптимизацию массы тела и модификацию окружающей среды.

Контроль хронической боли у собак с помощью НПВП определяется клиническим состоянием животного и ограничениями конкретного препарата по степени селективности к ЦОГ-2, что значимо влияет на его профиль безопасности. Также следует отметить, что нейропатическая боль плохо поддается контролю с помощью НПВП из-за ее невоспалительного характера [23]. Терапия моноклональными антителами против фактора роста нервов [31, 44], основного медиатора боли при остеоартрите, на данный момент в РФ официально недоступна.

Поэтому в практических условиях ветеринарные врачи часто используют препараты фармакологических групп, отличных от НПВП, из которых обращают на себя внимание габапентин и антидепрессанты [14, 24, 57].

Особый интерес для исследователей и ветеринарных врачей представляет тот факт, что комбинации габапентина с антидепрессантами показали превосходство над монотерапией габапентином как в доклинических [28, 35], так и в клинических условиях [13, 29]. Однако отпуск и применение медицинских антидепрессантов животным-компаньонам в нашей стране сопряжены с рядом сложностей. Эти данные и отсутствие на рынке эффективного, безопасного и удобного в применении комбинированного лекарственного средства для контроля хронической боли у собак и кошек послужили стимулом для специалистов группы научно-исследовательских разработок НПК «СКиФФ» (Москва), которая в течение нескольких лет занималась подбором оптимального соотношения ДВ, разработкой разных вариантов составов-прототипов, оценкой их эффективности при разных видах хронических болей, выбором финального варианта состава и изготовлением готовой лекарственной формы, итогом чего явился вывод на рынок уникального лекарственного препарата Тразапентин^® таблетки на основе комбинации сукцината тразодона и габапентина. Препарат предназначен для использования в составе комплексной терапии для улучшения качества жизни собак при хронических заболеваниях, сопровождающихся болевым синдромом, индуцированным хронической и нейропатической болью, ухудшающими эмоциональное состояние.

Тразапентин^® для собак выпускается в двух дозировках: таблетки для собак мелких пород — сукцината тразодона 20 мг и габапентина 80 мг на таблетку; таблетки для собак средних и крупных пород — 50 мг сукцината тразодона и 200 мг габапентина на таблетку. Собакам препарат применяют в средней разовой терапевтической дозе 5 мг/кг по сукцинату тразодона и 20 мг/кг по габапентину. Наличие пленочной оболочки с вкусовой добавкой повышает добровольную поедаемость препарата.

Сукцинат тразодона — доступный для безрецептурного отпуска и адаптированный для применения у собак и кошек антидепрессант, который является основой таких ЛП, как Экспресс Успокоин® [10] и Курс Успокоин таблетки [5]. Данные препараты успешно применяются ветеринарными врачами и владельцами собак для ситуационной или курсовой коррекции поведенческих отклонений, компульсивных расстройств, терапии когнитивных нарушений у пожилых животных и психогенных посттравматических состояний хронического характера [1…4].

Тразодон — производное триазолопиридина, антагонист и ингибитор обратного захвата серотонина, его LD₅₀ для крыс при внутрижелудочном введении составляет 2300 мг/кг. Это антидепрессант с мультимодальной, многофункциональной и дозозависимой фармакологической активностью; блокирует постсинаптические серотониновые (5-HT) рецепторы 5-HT2A и 5-HT2C и ингибирует пресинаптический транспортер обратного захвата серотонина [26, 48, 52]. Он используется в виде соли хлористоводородной кислоты в медицине для лечения депрессий, а также в качестве снотворного при бессоннице и расстройствах сна, в том числе при депрессии и посттравматическом стрессовом расстройстве [18], а в ветеринарии — как анксиолитическое и седативное средство [15, 25]. Помимо анксиолитического и антидепрессивного действия есть данные, подтверждающие эффективность тразодона для контроля нейропатической [17, 36, 39, 60] и хронической боли [12, 47].

Сукцинат тразодона, метаболизируясь, поставляет в организм янтарную кислоту, которая, воздействуя на нервную систему, моделирует активность ферментов клеточных мембран (кальцийнезависимой фосфодиэстеразы, аденилатциклазы, ацетилхолинэстеразы) и рецепторных комплексов (бензодиазепинового, ГАМК, ацетилхолинового), улучшает синаптическую передачу, способствует сохранению структурно-функциональной организации биомембран, повышению концентрации в головном мозге дофамина. Янтарная кислота обладает антиоксидантными свойствами, восполняет энергетический дефицит клеток и тканей за счет компенсации недостатка выработки сукцината в митохондриях [9].

Габапентин изначально был разработан как аналог ГАМК и противосудорожное средство [21]. Он не влияет на ГАМК-ергические нейронные системы, но обладает анальгезирующим и седативным действием [16, 43, 51], что позволило использовать его не только для лечения эпилепсии [32, 49], но и как средство контроля хронической и нейропатической боли [19, 56] и коррекции поведения у собак и кошек [53]. LD₅₀ габапентина для крыс при внутрижелудочном введении составляет >8000 мг/кг, что делает его практически нетоксичным при применении в общепринятых в ветеринарии дозах.

После перорального введения габапентин быстро всасывается, биодоступность составляет более 80%, при этом его абсорбция не зависит от прандиального статуса. Максимальные уровни соединения в крови достигаются через 1…3 ч. Габапентин почти полностью выводится почками и у собак метаболизируется в N-метил-габапентин [37].

Механизм действия габапентина основан на взаимодействии с субъединицей α-2-∂ пресинаптических кальциевых каналов в головном и спинном мозге, что приводит к снижению входа ионов Са2+ в нейроны [34]. Это, в свою очередь, уменьшает высвобождение таких нейромедиаторов, как L-глутамат, норадреналин и вещество Р, которые участвуют в передаче болевых сигналов и возбуждении [22]. Таким образом, его основной эффект связан с модуляцией активности нейронов за счет влияния на кальциевые каналы, что приводит к уменьшению гипервозбудимости нервной системы. Эти особенности делают габапентин особенно эффективным при нейропатической боли [50] и хронических болевых синдромах [59], а также при таких состояниях, связанных с гиперактивностью нейронов, как эпилепсия.

Несмотря на то, что анальгетическое действие сукцината тразодона и габапентина реализуются посредством различных механизмов, при одновременном введении отмечается их синергическое взаимодействие [27, 40, 55], показывающее значительное превосходство над монотерапией габапентином [13, 29, 35].

Таким образом, при применении Тразапентина в схемах комплексной терапии, благодаря синергетическому эффекту ДВ, препарат одновременно влияет на сенсорную и эмоциональную составляющую хронического болевого синдрома, устраняя боль и улучшая эмоциональное состояние собак при остеоартрозе, остеоартрите, синовите, панкреатите с болевым синдромом, онкологических заболеваниях, а также в послеоперационный период.

Взаимодополняющее антиноцицептивное действие сукцината тразодона и габапентина в составе препарата обеспечивает:

• нормализацию двигательной и игровой активности,
• улучшение социального взаимодействия,
• улучшение эмоционального состояния,
• устранение агрессии,
• устранение деструктивного поведения и других поведенческих изменений, вызванных хронической болью,
• снижение вероятности самотравмирования животных, травмирования ветеринарного персонала и владельцев животных в послеоперационный период,
• облегчение проведения лечебно-профилактических манипуляций.

Обязательным этапом разработки лекарственного средства для ветеринарного применения является оценка его безопасности на лабораторных животных.

Цель исследования

Определить токсикологические параметры нового оригинального ЛП Тразапентин^® таблетки для собак.

Материалы и методы

Токсикологические свойства ЛП Тразапентин^® таблетки для собак изучали на базе вивария Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института — обособленного структурного подразделения ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии» (ИЦ «Аргус») в соответствии с приказом [6], руководствами [7,8] и ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности». В экспериментах использовали модификацию препарата с содержанием в 1 таблетке 50 мг сукцината тразодона и 200 мг габапентина.

Характеристика экспериментальных животных. Для определения токсикологических характеристик препарата было задействовано 76 крыс, 8 морских свинок и 2 кролика. Животные были распределены по группам случайным образом. В качестве основного критерия отбора была выбрана масса тела. Разброс по массе при формировании групп составлял примерно 10%. Каждому животному был присвоен уникальный номер.

Для адаптации животные содержались в клетках в течение пяти дней до начала введения исследуемого препарата. Это позволило им привыкнуть к условиям лаборатории. Карантин не проводился, так как используемые животные собственного разведения.

При кормлении крыс, морских свинок, кроликов использовали стандартный лабораторный рацион. Все животные имели неограниченный доступ к водопроводной воде.

Оценка острой пероральной токсичности ЛП Тразапентин^® таблетки. В ходе эксперимента была изучена острая пероральная токсичность ЛП Тразапентин^® таблетки для собак. Схема исследования приведена в таблице 1.

Для эксперимента было создано шесть групп крыс: одна контрольная и пять опытных. В каждой группе было по шесть особей. Крысы из опытных групп получали разные дозы исследуемого препарата, а крысы из контрольной группы получали 1%-ю водную взвесь крахмала в объеме 5 мл. Перед тем как вводить препарат, все животные были выдержаны на голодной диете в течение 12 ч.

Исследуемый препарат использовали в форме суспензии, которую готовили на основе 1%-й водной взвеси крахмала. Суспензию готовили индивидуально для каждой крысы, учитывая дозу препарата в миллиграммах на кг МТ. Препарат вводили с помощью одноразового шприца объемом 5 мл и атравматичного пищеводного зонда.

После того как животным ввели суспензию препарата, за ними непрерывно наблюдали в течение 4 ч, а затем, в течение первых 12 ч, с интервалом в 1 ч. Период наблюдения за крысами из опытных и контрольной групп составил 14 дней.

Оценивали поведение, дыхание, состояние шерсти и кожи, активность, цвет слизистых оболочек, реакцию на свет, координацию движений, потребление корма и воды, а также изменение массы тела.

Оценка хронической пероральной токсичности ЛП Тразапентин^® таблетки. Для эксперимента сформировано четыре группы крыс по 10 особей.

Исследуемый препарат вводили крысам в форме болюсов один раз в день в течение 90 дней. После этого за животными наблюдали еще 10 дней (период отмены препарата и восстановления). Дозировку препарата рассчитывали индивидуально для каждого животного в зависимости от его массы тела. Животным из контрольной группы вводили болюсы без добавления исследуемого препарата. Схема исследования приведена в таблице 2.

Клиническая оценка общего состояния. Мониторинг состояния крыс в ходе эксперимента проводился ежедневно и индивидуально для каждого животного. В ходе исследования тщательно отслеживались различные аспекты здоровья крыс, включая поведение, уровень активности, тонус мышц, характер дыхания, состояние шерсти и кожи, цвет слизистых оболочек, консистенцию экскрементов, потребление пищи и воды. Особое внимание уделялось возможным признакам токсического воздействия на организм.

Масса тела. МТ подопытных крыс измеряли индивидуально до начала эксперимента и каждые семь дней в течение всего эксперимента.

Исследование крови. В ходе эксперимента на 45-й и 90-й день исследовали кровь. У пяти крыс из группы (у произвольных животных) кровь брали путем сердечной пункции (прижизненно). Во всех случаях кровь брали у животных натощак (голодная диета 8 ч), соблюдая правила асептики и антисептики. Исследовали следующие показатели: количество эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, гемоглобина; лейкограмму, СОЭ, содержание общего белка, мочевины, креатинина, глюкозы, холестерина; активность АсАТ, АлАТ, ЩФ; количество общего и прямого билирубина, общего кальция, неорганического фосфора, триглицеридов.

Патоморфологическое исследование. По истечении 45 дней и в завершение эксперимента, на 90-й день, из каждой группы было изъято по три особи (проведена эвтаназия) для патологоанатомического анализа и взвешивания внутренних органов.

Определение аллергизирующих свойств ЛП Тразапентин^® таблетки. Чтобы оценить, насколько препарат Тразапентин^® в форме таблеток для собак может вызывать аллергию, на морских свинках провели провокационные кожные пробы.

Для этого на выстриженный участок кожи на боку морской свинки нанесли по три капли раствора исследуемого препарата в виде суспензии с концентрацией 30% на 1% водной взвеси крахмала. Каждой морской свинке было проведено 100 накожных аппликаций.

В течение всего эксперимента за животными наблюдали, оценивая их общее состояние, местную температуру кожи, покраснение, наличие расчесов, отекв, кровоизлияний, утолщения кожной складки и болезненности при пальпации места обработки. Реакцию кожи учитывали ежедневно по шкале оценки кожных проб (табл. 3).

В ходе второй серии экспериментов оценили аллергическое воздействие исследуемого вещества на кроликов с помощью конъюнктивальной пробы.

Двум подопытным кроликам в нижний отдел конъюнктивального мешка было закапано по 0,1 мл исследуемого препарата в виде 30%-й суспензии, приготовленной на 1%-й водной взвеси крахмала. В другой (контрольный) глаз одновременно закапали 0,1 мл дистиллированной воды. Глаза кроликов были осмотрены через 30 мин и 24 ч после воздействия.

В ходе офтальмологического обследования учитывали общее состояние слизистой оболочки глаза и век, наличие инъекции сосудов склеры и роговицы, а также секрецию слезной жидкости.

Статистическая обработка результатов экспери ментов. Использовали программное обеспечение Miсrosoft® Excel. Уровень значимости различий (р) принят на уровне 0,05. В таблицах представлены данные среднего арифметического ± ошибка среднего (М±m).

Результаты

Острая пероральная токсичность. Результаты исследования, полученные в ходе наблюдения за животными в течение двух недель, приведены в таблице 4.

Для исследуемого препарата не были определены точные значения летальных доз — абсолютной LD100 и средней LD₅₀. В ходе эксперимента на крысах были обнаружены обратимые изменения, которые проявлялись в разной степени в зависимости от дозы исследуемого ЛП.

В 1-й группе крыс наблюдали следующие симптомы: через 20…35 мин после введения препарата наступала седация и угнетение, переходящие в полусонное состояние. Через 1 ч после введения препарата крысы спали, но при механическом воздействии просыпались на 5…10 с.

Во 2-й группе крыс наблюдали похожие симптомы: у трех животных симптомы седации и угнетения были более выражены, но у трех крыс из группы степень угнетения была средней, а подвижность и двигательная активность более выражены. Через 1 ч после введения препарата крысы спали, но при механическом воздействии просыпались на 5…10 с.

В течение первых 1,5…2 суток после введения препарата у крыс из 1-й и 2-й групп сохранялись признаки сонливости, угнетения, снижения двигательной активности, потребления корма и воды, а также брадипноэ. Однако через 2 суток состояние животных нормализовалось и стало соответствовать показателям контрольных аналогов.

В 3-й и 4-й группах симптомы угнетения были менее выражены, а седативный эффект проявлялся через 30…40 мин после введения препарата. В течение первых 2…5 ч все крысы были в сознании, затем засыпали, но при внешнем воздействии просыпались и адекватно реагировали на внешние раздражители. Признаки угнетения исчезали через 12…15 ч.

В 5-й группе средняя степень угнетения проявлялась через 40…50 мин, двигательная активность снижалась, а сонливость длилась 3…6 ч. Крысы реагировали на внешние раздражители. Активность и кормовые привычки были сохранены. Физиологические параметры восстанавливались через 10…13 ч после введения препарата.

За весь период наблюдений, который составил 14 суток, не было обнаружено признаков негативного влияния исследуемого препарата на организм лабораторных животных.

Установлено отсутствие гибели опытных лабораторных животных, что позволяет в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности» отнести исследуемый препарат к IV классу опасности «Вещества малоопасные».

Хроническая пероральная токсичность. В опыте по изучению хронической токсичности у всех групп животных показатель выживаемости составил 100%.

У крыс из 1-й опытной группы, которые получали максимальную дозу препарата Тразапентин^® таблетки для собак (530 мг/кг массы тела), в первые 13…17 дней эксперимента после приема препарата наблюдали следующие изменения в поведении: в легкой степени угнетение и сонливость; снижение активности, реакции на внешние раздражители, аппетита и потребления воды. Через 17 дней состояние крыс пришло в норму и не отличалось от состояния контрольных животных.

У крыс из 2-й и 3-й опытных групп (доза препарата составляла 265 мг/кг и 106 мг/кг, соответственно) не отмечено никаких негативных изменений в поведении в течение всего периода наблюдений.

В ходе эксперимента у крыс всех опытных групп не было выявлено значимых различий в показателях частоты дыхания и температуры тела по сравнению с контрольной группой. Также не было обнаружено выпадения шерсти, изменения цвета и структуры, алопеций. Слизистые оболочки были розового цвета и не имели повреждений. Функции пищеварения и мочеотделения у грызунов в опытных группах не были нарушены.

Длительное применение препарата Тразапентин^® таблетки для собак в исследуемых дозах не оказало негативного влияния на рост и развитие крыс (табл. 5).

Анализ крови всех крыс, участвующих в эксперименте, не показал никаких изменений на протяжении всего исследования (табл. 6).

В две контрольные точки наблюдения (на 45-й и 90-й день) у опытных и контрольных крыс были взяты образцы сыворотки крови для анализа биохимических показателей. Результаты анализов показали, что значения всех параметров находились в пределах нормы для данного вида и возраста животных (табл. 7).

Были выявлены некоторые межгрупповые различия между контрольными и опытными животными по показателям общего белка, ЩФ и снижение активности АлАТ. Однако данные изменения не носят клинической значимости и не указывают на токсическое действие препарата.

Результаты патоморфологического исследова ния. На 45-й и 90-й день эксперимента из каждой группы было выведено по три крысы, которые были подвергнуты эвтаназии для патологоанатомического исследования.

В результате вскрытия крыс не было обнаружено никаких патологических изменений или различий между органами животных из исследуемых групп. При определении массы внутренних органов крыс значимой разницы между группами не выявлено (табл. 8).

Результаты исследования показывают, что крысы хорошо переносят ЛП Тразапентин^® таблетки для собак. Препарат не оказывал дополнительного воздействия на органы при пероральном применении в течение 90 дней. Также не было выявлено значимых изменений клинико-лабораторных показателей на 45-й и 90-й день исследования.

Аллергизирующее действие. В ходе исследования сенсибилизирующего действия ЛП Тразапентин^® в форме таблеток для собак не было обнаружено никаких изменений на месте кожных аппликаций за весь период наблюдений: покраснения кожи, расчесов, отека, геморрагий, утолщения кожной складки или болезненной реакции при пальпации места обработки. Упругость, эластичность и подвижность кожи оставались неизменными. На основании полученных результатов можно сделать вывод об отсутствии сенсибилизации.

Согласно проведенной оценке, ЛП Тразапентин^® таблетки для собак не вызывает изменений при нанесении на конъюнктиву кролика. Сразу после закапывания у животных наблюдалось частое моргание и трение глаза лапой в течение первых 5 с, что связано с попаданием мелких частиц суспензии на слизистую оболочку глаза.

При визуальном осмотре через 30 мин и 24 ч не было выявлено зуда, сужения зрачка, покраснения слизистой, сосудистой реакции, изъязвлений конъюнктивы, рубцовых изменений век или помутнения роговицы.

Таким образом, тестирование ЛП Тразапентин^® таблетки для собак методом накожных аппликаций и в конъюнктивальной пробе показало отсутствие у препарата аллергизирующих свойств.

Конфликт интересов

Производителем препарата Тразапентин^® и спонсором данного исследования является ООО «НПК «СКиФФ». Решение о публикации результатов научной работы принадлежит разработчику ООО «НПК «СКиФФ».